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摘要: 利用多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR ) 對來源于一種生物殺蟲劑(bacu loviru s) 的幾丁質(zhì)酶基因進(jìn)行體外擴(kuò)增, 并插入載體質(zhì)粒pRO K₂ 中, 然后轉(zhuǎn)化大腸桿菌(E scherich ia coli)XL ₁B lue。用重組質(zhì)粒pRO K₂ DNA 轉(zhuǎn)化植物轉(zhuǎn)基因載體——土壤農(nóng)桿菌(A g robacteria tum ef aciens) LBA 4404 菌株。借助于土壤農(nóng)桿菌侵染煙草葉圓片, 將目的基因?qū)搿Ｍㄟ^組織培養(yǎng)誘導(dǎo)生芽和生根, 獲得煙草再生植株。利用含卡那霉素的培養(yǎng)基對再生煙株進(jìn)行初步篩選。進(jìn)一步PCR 和W estern 印跡檢測結(jié)果表明: 轉(zhuǎn)基因煙草中有幾丁質(zhì)酶基因和蛋白的表達(dá)。初步檢測結(jié)果表明: 轉(zhuǎn)基因煙草具有較高的幾丁質(zhì)酶活性。